銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍(lán)蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、細(xì)胞色素氧化酶等，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結(jié)合，形成銅藍(lán)蛋白；5~10%的銅與清蛋白結(jié)合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測(cè)方法有分光光度計(jì)、原子吸收光譜法、中子活化分析法等。          

銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone微板法)原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結(jié)合的銅從白蛋白中解離出來，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與Cuprizone絡(luò)合，形成穩(wěn)定的藍(lán)色絡(luò)合物，通過酶標(biāo)儀測(cè)定620nm處吸光度，形成的藍(lán)色與血清、血漿銅成線性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)公式計(jì)算出銅含量，該檢測(cè)試劑盒在62.8μmol/L以下線性關(guān)系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone微板法

pDC316-MBH-mNeonGreen-CMV-PSENEN(human)-FLAG

pLV3-CMV-CPSF3(human)-3×FLAG-Puro

pCMV-CCR7(human)-3×HA-Neo

pCMV-Prkci(mouse)-HA-Neo

pCMV-EIF2AK2(human)-3×FLAG-Neo

pCMV-USP7(human)-3×FLAG-Neo

pLV3-CMV-Itgb7(mouse)-CopGFP-Puro

pCMV-COL1A1(human)-3×FLAG-Neo

pCMV-EDA2R(human)-2-3×FLAG-Neo

pCMV-Pkm(mouse-opt)-Neo

pCMV-Snap23(mouse)-3×FLAG-Neo

pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

pLV3-U6-NLRC5(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pLV3-U6-CXCR3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA1-CopGFP-Puro

pCMV-FRAS1(human)-3×FLAG-Neo

pLV3-U6-STC1(human)-shRNA2-EGFP-Puro

pLV3-U6-NR2F1(human)-shRNA2-EGFP-Puro

pLV3-U6-RAD51(human)-shRNA2-Puro

pLV3-U6-STC1(human)-shRNA3-EGFP-Puro

pLV3-U6-CD63(human)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA3-CopGFP-Puro

pLV3-U6-PRKN(human)-shRNA1-EGFP-Puro

pLV3-U6-USP20(human)-shRNA2-CopGFP-Puro