細胞名稱：WM239a人黑色素瘤細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

售后條款:

1.）細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);

2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,(需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

5. 活率問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā);

6. 細胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

2）.細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);

6. 細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定。

YS1990CBEP2D人支氣管上皮細胞

YS1991CCLL人慢性淋巴細胞白血病細胞

YS1992C16HBE人支氣管上皮樣細胞

YS1993CEC109人食管癌細胞

YS1994CEBC-1人肺鱗癌細胞

YS1995CC26小鼠結(jié)腸癌細胞

YS1996CHLEpiC人晶狀體上皮細胞

YS1997CPC-3M-2B4人低轉(zhuǎn)移前列腺癌細胞

YS1998CAC16人心肌細胞

YS2000CSol8小鼠骨骼肌肌肉母細胞

YS2001CJ45.01人急性T細胞白血病細胞

YS2002CS16大鼠施旺細胞

YS2003CKG-1人急性髓系白血病細胞

YS2005CSUIT-2人胰腺癌細胞

YS2006CTK-1小鼠T淋巴瘤細胞

YS2007CMC/9小鼠肥大細胞

YS2008CPBL人外周血淋巴細胞

YS2009CD10.G4.1小鼠Th2型T淋巴細胞

YS2011CMKN7人胃癌細胞

YS2012CHT-3人子宮頸癌細胞

YS2013CZR-75-30人乳腺癌細胞

YS2014ChASMC人氣道平滑肌細胞

YS2015CKM-H2人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2016CDHBE人支氣管上皮病變細胞

YS2017CMBVP小鼠腦血管周細胞

YS2018CWILL-2人B細胞淋巴瘤

YS2019CNOMO-1人白血病細胞

YS2020CM-1小鼠腎集合管細胞

YS2021CSJCRH30[RC13,RMS13,SJRH30]人骨髓橫紋肌肉癌細胞

YS2022CAKR小鼠食管癌細胞

YS2023CRGE大鼠腎小球內(nèi)皮細胞

YS2024C8505C人甲狀腺癌細胞

YS2025CC8161人黑色素瘤細胞

YS2026CSBC-3人小細胞肺癌細胞

YS2027CRPMI-7951人黑色素瘤細胞

YS2028CJHH-7人肝癌細胞

YS2029CEMT-6小鼠乳腺癌細胞

YS2030CHDMEC人皮膚微血管內(nèi)皮細胞

YS2031CHCO人顱骨成骨細胞

YS2032CBIC-1人食管腺癌細胞

YS2033CHPF人肺成纖維細胞

YS2034CNKL人NK細胞

YS2035CM2-10B4小鼠骨髓纖維原細胞

YS2036CL428人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2037ChTERT-HPNE人胰腺導(dǎo)管上皮細胞

YS2038CHDLM-2人霍奇金淋巴瘤細胞

YS2039CAHH-1人外周血額B淋巴細胞

YS2040CLTEP-sm人小細胞肺癌細胞

YS2041CRPMI1788人外周血B淋巴細胞

YS2042CNCI-H727人肺支氣管腫瘤細胞

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