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低代次高活性ATCC細(xì)胞培養(yǎng)指南

更新時(shí)間:2025-10-09      點(diǎn)擊次數(shù):101

ATCC 細(xì)胞即美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)所保藏的細(xì)胞,以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹:

ATCC 細(xì)胞的種類

腫瘤細(xì)胞系:如 HeLa 細(xì)胞(宮頸癌細(xì)胞)、A549 細(xì)胞(肺癌細(xì)胞)、MCF-7 細(xì)胞(乳腺癌細(xì)胞)等,這些腫瘤細(xì)胞系常用于腫瘤發(fā)生機(jī)制研究、抗癌藥物篩選和研發(fā)等領(lǐng)域。

正常細(xì)胞系:包括 MRC-5 細(xì)胞(人胚肺成纖維細(xì)胞)、HUVEC 細(xì)胞(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)等,可作為正常細(xì)胞對(duì)照,用于研究細(xì)胞的正常生理功能、細(xì)胞分化、細(xì)胞代謝等。

干細(xì)胞系:如一些胚胎干細(xì)胞系和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞系,在再生醫(yī)學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值,可用于研究細(xì)胞的分化潛能、組織器官的發(fā)育機(jī)制等。

atcc.png

低代次高活性ATCC細(xì)胞培養(yǎng)指南

一、細(xì)胞復(fù)蘇:喚醒沉睡的“種子"

剛從ATCC獲取的凍存細(xì)胞就像冬眠的種子,需要溫柔喚醒:

快速解凍:37℃水浴中輕輕搖晃,1-2分鐘內(nèi)完成

梯度稀釋:用預(yù)溫培養(yǎng)基按1:5緩慢稀釋,避免滲透壓沖擊

離心去凍存液:1000rpm離心5分鐘,去除含DMSO的凍存液

低密度接種:建議初始接種密度為1×10^4 cells/cm2

二、傳代操作:把握黃金窗口期

低代次細(xì)胞(P3-P8)的傳代是保持活性的關(guān)鍵階段:

時(shí)機(jī)選擇:融合度達(dá)80%-90%時(shí)傳代,避免過度生長

消化控制:0.25%胰酶作用30-60秒,顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮

終止技巧:用含血清培養(yǎng)基按1:1比例中和胰酶

分盤比例:推薦1:3至1:4分割,保持群體增殖優(yōu)勢

三、活性維持:打造細(xì)胞“舒適圈"

這些細(xì)節(jié)決定細(xì)胞的長期表現(xiàn):

環(huán)境穩(wěn)定:CO2濃度偏差不超過0.5%,溫度波動(dòng)小于0.3℃

營養(yǎng)更新:每48小時(shí)更換培養(yǎng)基,陳舊培養(yǎng)基積累代謝廢物

凍存策略:P5前建立主細(xì)胞庫,每代凍存5-10支備用

污染防控:操作前紫外線消毒30分鐘,定期檢測支原體


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