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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見(jiàn)的生物性污染主要包括以下幾類：
| 類別 | 典型代表 | 主要特征與危害 |
|---|---|---|
| 細(xì)菌污染 | 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、假單胞菌等 | 培養(yǎng)基在 48?72?h 內(nèi)出現(xiàn)渾濁、pH 下降，顯微鏡下可見(jiàn)球形、桿形或鏈形細(xì)菌；會(huì)迅速抑制細(xì)胞增殖甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡 |
| 真菌污染（酵母 + 霉菌） | 酵母菌、念珠菌、曲霉等 | 初期培養(yǎng)液仍保持清亮，隨后出現(xiàn)絲狀或絮狀漂浮物；顯微鏡下可見(jiàn)出芽球或分枝絲體；生長(zhǎng)速度快，難以挽救已被污染的細(xì)胞 |
| 支原體（Mycoplasma） | 支原體肺炎支原體等 | 體積極?。?.1?0.3?µm），不被常規(guī)抗生素殺死，肉眼難以發(fā)現(xiàn)；會(huì)改變細(xì)胞代謝、形態(tài)和基因表達(dá)，長(zhǎng)期影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 病毒污染 | 嗜血病毒、腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒等 | 體積極?。ā?.05?0.1?µm），光學(xué)顯微鏡不可見(jiàn)；常通過(guò)血清、細(xì)胞系或?qū)嶒?yàn)人員引入；可導(dǎo)致細(xì)胞基因組不穩(wěn)定、死亡或?qū)嶒?yàn)數(shù)據(jù)失真 |
| 原蟲(chóng)（Protozoa） | 阿米巴、鞭毛蟲(chóng)等 | 在顯微鏡下可見(jiàn)活動(dòng)的單細(xì)胞或多細(xì)胞體；大量增殖會(huì)直接吞噬或競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞養(yǎng)分，導(dǎo)致細(xì)胞死亡 |
| 黑膠蟲(chóng)（Nematodes） | 黑膠蟲(chóng)幼蟲(chóng)等 | 可穿透濾膜，低倍鏡呈黑點(diǎn)狀，高倍鏡可見(jiàn)小蟲(chóng)游動(dòng)；常來(lái)源于血清或動(dòng)物組織，雖不一定使培養(yǎng)液渾濁，但會(huì)干擾細(xì)胞形態(tài)觀察 |
| 交叉污染（非細(xì)胞生物污染） | 其他細(xì)胞系的混入、細(xì)胞系誤認(rèn) | 由于操作不規(guī)范或共享培養(yǎng)基/試劑導(dǎo)致；會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果被錯(cuò)誤細(xì)胞系掩蓋，常需通過(guò) DNA 指紋或 STR 鑒定排查 |
補(bǔ)充說(shuō)明
以上七類是目前文獻(xiàn)中最常提及的細(xì)胞生物污染。
除了上述微生物，還可能出現(xiàn) 內(nèi)毒素、增塑劑等化學(xué)污染
防控要點(diǎn)（簡(jiǎn)要）
嚴(yán)格無(wú)菌操作：使用經(jīng)濾的培養(yǎng)基、血清，操作時(shí)佩戴無(wú)菌手套、口罩，避免說(shuō)話、咳嗽。
定期檢測(cè)：顯微鏡觀察、細(xì)菌/真菌培養(yǎng)、支原體 PCR、病毒檢測(cè)試劑盒等。
使用高質(zhì)量試劑：采購(gòu)經(jīng)認(rèn)證的無(wú)菌血清、培養(yǎng)基，必要時(shí)進(jìn)行熱滅活或過(guò)濾。
防止交叉污染：不同細(xì)胞系分開(kāi)培養(yǎng)、使用獨(dú)立的培養(yǎng)器具、定期進(jìn)行細(xì)胞系鑒定。
了解并及時(shí)識(shí)別這些生物污染類型，是保證細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)可靠性和可重復(fù)性的關(guān)鍵。
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