DPPH自由基清除率檢測(cè)試劑盒(比色法)

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

在生命活動(dòng)的代謝過(guò)程中不斷產(chǎn)生各種自由基而自由基的積累會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷而引起衰老、腫瘤、中風(fēng)、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在眾多自由基中2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一種較穩(wěn)定的自由基，當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)顏色由紫色向黃色轉(zhuǎn)變，吸光度隨之變小。

雅吉生物 DPPH自由基清除率檢測(cè)試劑盒(比色法)又稱(chēng)氮自由基清除能力檢測(cè)試劑盒或氮自由基清除率檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基，含一個(gè)單電子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有強(qiáng)吸收，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子與此單電子配對(duì)，溶液會(huì)褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過(guò)吸光度下降的程度來(lái)反應(yīng)樣品的氮自由基清除能力，主要用于檢測(cè)血清、植物組織、抗氧化類(lèi)食品、保健品及藥品等樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

二、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1、蒸餾水、無(wú)水乙醇

2、實(shí)驗(yàn)材料∶植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等

3、研缽或勻漿器或粉碎機(jī)或超聲破碎機(jī)

4、離心機(jī)、離心管

5、恒溫水浴鍋、恒溫干燥箱

6、電子天平、30~50目篩

7、分光光度計(jì)、比色皿

四、操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品∶取新鮮植物樣本，清洗干凈，研缽研碎(粉碎)，干燥箱烘干后過(guò)篩，稱(chēng)取0.05g 樣品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm離心10min，取上清液待用;血清或尿液樣品可直接測(cè)定。

③細(xì)胞樣品︰按每5×10°個(gè)細(xì)胞加入0.8ml氮自由基提取液，超聲破碎(功率200W,超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次)，10000rpm 離心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等樣品︰按樣品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

⑤高活性樣品︰如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制維生素C溶液︰將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml維生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。

3、配制Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液︰如需測(cè)線性關(guān)系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液;如需清除率約為100%的陽(yáng)性對(duì)照，建議選用大于 30μg/ml 的Vc標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4、分光光度計(jì)開(kāi)機(jī)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)517nm(500~530nm亦可)，無(wú)水乙醇調(diào)零。

5、DPPH加樣∶按照下表設(shè)置空白管、樣本測(cè)定管、樣本對(duì)照管、陽(yáng)性對(duì)照管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，混勻，室溫避光靜置30min。

6、OD值測(cè)定∶將各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度計(jì)檢測(cè)各管吸光度值，依次記為A₀、A₁、A₂、A₃。

五、計(jì)算：

陽(yáng)性對(duì)照·DPPH清除率(%)= (A₀- A₃)/A₀×100%

待測(cè)樣本·DPPH清除率(%)=[A₀-( A₁- A₂)]/A₀×100%

備注:

A₀=空白管的吸光度值

A₁=樣本測(cè)定管的吸光度值

A₂=樣本對(duì)照管的吸光度值

A₃=陽(yáng)性對(duì)照管的吸光度值

六、注意事項(xiàng)：

1、正式測(cè)定之前建議選擇2~3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

2、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，當(dāng)天提取當(dāng)天測(cè)定。

3、不同樣本清除DPPH自由基的能力差異很大。

4、如樣本DPPH清除率大于90%，應(yīng)用提取液稀釋?zhuān)蝗鐦颖?DPPH清除率小于5%，應(yīng)提高樣本用量以提高有效成分濃度。

5、樣品中不宜添加Triton、DTT等可能影響氧化還原反應(yīng)的成分。

6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

七、有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。